前言

Treg細(xì)胞是CD4＋T細(xì)胞的一個(gè)亞群，通過預(yù)防自身免疫、控制過度炎癥和維持免疫耐受，對(duì)免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)特性在癌癥中會(huì)促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。對(duì)TIL亞群的分析表明，免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的組成與患者預(yù)后之間存在明確的關(guān)聯(lián)。過表達(dá)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的TIL通常與良好的預(yù)后相關(guān)，而TIL中Treg細(xì)胞的頻率增加與不良預(yù)后相關(guān)。

Treg細(xì)胞的分化和功能依賴于譜系特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)。FOXP3基因功能喪失改變的人類患有免疫失調(diào)、多內(nèi)分泌疾病、腸病、X連鎖（IPEX）綜合征，表現(xiàn)為廣泛的自身免疫和炎癥損傷。Treg細(xì)胞在胸腺中由一組前體細(xì)胞發(fā)育而來，這是一個(gè)需要T細(xì)胞受體（TCR）和IL－2激活的兩步過程。

Treg細(xì)胞可以通過各種不同的機(jī)制抑制免疫反應(yīng)。CD25是IL－2受體的一種高親和力亞單位，在Treg細(xì)胞上組成性高表達(dá)，但在效應(yīng)T細(xì)胞上也上調(diào)。Treg細(xì)胞上高水平表達(dá)的CD25競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合IL－2，從而剝奪效應(yīng)T細(xì)胞的這種專性生長(zhǎng)因子。Treg細(xì)胞還表達(dá)一系列抑制分子，如CTLA－4，與Treg介導(dǎo)的抑制有關(guān)。此外，Treg細(xì)胞還可以分泌抑制性細(xì)胞因子，如IL－10和TGF－β。

基于這些有效的免疫抑制機(jī)制，Treg細(xì)胞通常被認(rèn)為是最有效的抗腫瘤免疫抑制劑。因此，以Treg細(xì)胞為靶點(diǎn)的癌癥治療策略也是目前的研究熱點(diǎn)。

Treg的分類和功能

Tregs可分為兩類：天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（nTregs）和誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（iTregs）。兩種類型的Tregs都普遍表達(dá) Foxp3。nTregs在胸腺中自然發(fā)育，其抑制作用是通過細(xì)胞間接觸實(shí)現(xiàn)的，它們的主要功能是維持正常的免疫耐受和控制炎癥反應(yīng)。

iTregs來源于腫瘤微環(huán)境信號(hào)誘導(dǎo)的外周原始T細(xì)胞，包括腫瘤抗原、細(xì)胞因子（如TGF－β）和其他可溶性分子。iTregs通過多種促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的機(jī)制抑制效應(yīng)T細(xì)胞（Teff）、NK細(xì) 胞和DC的抗腫瘤免疫作用。

Tregs主要有以下五種功能機(jī)制：①Tregs分泌抑制性細(xì)胞因子，包括 IL－10、TGF－β 和 IL－35。② Tregs 通過顆粒酶和穿孔素殺死效應(yīng)細(xì)胞。③ Tregs 影響效應(yīng)細(xì)胞的功能：Treg 與效應(yīng)T細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)消耗 IL－2，從而抑制效應(yīng)T細(xì)胞的生長(zhǎng)；Tregs通過產(chǎn)生胞外酶CD39和CD73 促進(jìn)TME中腺苷的產(chǎn)生，誘效應(yīng)細(xì)胞導(dǎo)的抑制和抗增殖作用；Tregs通過縫隙連接將大量 cAMP 轉(zhuǎn)移到效應(yīng)T細(xì)胞，干擾其代謝。④Tregs通過刺激性和抑制性受體（CTLA－4 或 LAG3）誘導(dǎo)DC耐受，后者通過IDO進(jìn)一步抑制T細(xì)胞的能力。⑤MDSCs和Tregs 產(chǎn)生的因子形成正反饋環(huán)，促進(jìn)增殖，增強(qiáng)抑制環(huán)境。        

此外，一項(xiàng)研究使用一種新的策略來定義Tregs， Th1樣Tregs（T－ 234bet＋I(xiàn)FNγ＋Foxp3＋），Th2 樣Tregs（Gata3＋I(xiàn)RF4＋I(xiàn)L4＋Foxp3＋）和Th17樣Tregs（IL－17＋RORγt＋Foxp3＋），這為靶向 Tregs 治療提供了新思路。

Treg抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)的機(jī)制

Treg通過多種機(jī)制阻礙抗腫瘤免疫反應(yīng)。在Tregs中，共抑制受體細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4（CTLA－4）通過與APCs中的CD80／B7－1和CD86／B7－2結(jié)合干擾共刺激信號(hào)，從而抑制效應(yīng)T細(xì)胞中的共刺激受體CD28。          

IL－2是Treg和效應(yīng)T細(xì)胞生存所必需的細(xì)胞因子。與效應(yīng)T細(xì)胞相比，Treg主要通過由α（CD25）、β（CD122）和γ（CD132）亞單位組成的更高親和力受體結(jié)合IL－2。此外，Tregs比效應(yīng)T細(xì)胞具有更高的CD25表達(dá)，而CD25是IL－2的一種高親和力受體。這使得Treg在利用TME中有限的IL－2方面具有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。因此，在TME中，Treg的累積量大于效應(yīng)T細(xì)胞。同時(shí)，Treg還分泌免疫抑制分子（包括免疫抑制細(xì)胞因子）抑制抗腫瘤免疫。Treg產(chǎn)生TGF－β、IL－10和IL－35導(dǎo)致免疫抑制。

表達(dá)在Tregs細(xì)胞表面的CD39和CD73作為外核苷酸酶，分別將ATP或ADP水解為AMP和AMP水解為腺苷。CD39和CD73產(chǎn)生的腺苷會(huì)抑制效應(yīng)T細(xì)胞。當(dāng)Treg在TME中發(fā)生凋亡時(shí)，凋亡的Treg通過外核苷酸酶釋放大量腺苷，從而產(chǎn)生更強(qiáng)的抗腫瘤免疫抑制。

TME中Treg浸潤(rùn)的機(jī)制

趨化因子和細(xì)胞因子依賴性浸潤(rùn)

Treg具有多種趨化因子受體。趨化因子梯度，如CCR4－CCL17／22，CCR5－CCL5， CCR8－CCL1，和CCR10－CCL28，可參與將Treg招募到TME中。              

在炎癥腫瘤中，炎癥細(xì)胞產(chǎn)生Treg招募趨化因子，如CCL22。CCR8＋Treg被CCR8配體（如CCL1和CCL18）招募到TME等炎癥部位，CCL1不僅將CCR8＋Treg招募到腫瘤中，還誘導(dǎo)對(duì)Treg抑制至關(guān)重要的FOXP3、CD39和IL－10的STAT3依賴性上調(diào)，從而增強(qiáng)Treg的免疫抑制活性。在一系列細(xì)胞因子和趨化因子受體中，與正常組織駐留的Tregs相比，CCR8僅在人類乳腺癌的腫瘤浸潤(rùn)性Tregs中顯著上調(diào)，表明CCR8是TME中Tregs的一個(gè)有希望的治療靶點(diǎn)，而不會(huì)引起系統(tǒng)性自身免疫。

基于TME代謝適應(yīng)的生存優(yōu)勢(shì)

效應(yīng)T細(xì)胞和Treg在正常和炎癥條件下使用不同的代謝系統(tǒng)，Treg表現(xiàn)出更強(qiáng)的生存優(yōu)勢(shì)。

TCR刺激通過磷酸肌醇3－激酶（PI3K）－雷帕霉素（mTOR）信號(hào)途徑激發(fā)特定的代謝程序，導(dǎo)致氨基酸和葡萄糖的吸收增加，從而增強(qiáng)有氧糖酵解�；罨�的效應(yīng)T細(xì)胞將其代謝程序從氧化磷酸化（OXPHOS）轉(zhuǎn)變?yōu)橛醒跆墙徒�，這是其生存和功能所必需的，從而導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞和TME中的腫瘤細(xì)胞之間的葡萄糖競(jìng)爭(zhēng)。腫瘤細(xì)胞中的代謝重編程將TME轉(zhuǎn)變?yōu)闋I養(yǎng)受限，富含乳酸和低氧環(huán)境，不利于效應(yīng)T細(xì)胞的存活和功能。

然而，在TME中，Treg可以在如此惡劣的條件下存活并保持其免疫抑制功能。FOXP3通過抑制糖酵解和促進(jìn)氧磷和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）氧化，因此，Treg可以利用乳酸作為能量來源。當(dāng)腫瘤浸潤(rùn)性非Treg將丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸以產(chǎn)生NAD＋以維持糖酵解時(shí)，TME中的Treg將丙酮酸轉(zhuǎn)化為線粒體中的乙酰輔酶a以觸發(fā)三羧酸循環(huán)，這為Treg提供了比其他T細(xì)胞更大的存活益處。

此外，即使在低葡萄糖條件下，Treg還可以利用脂肪酸實(shí)現(xiàn)其增殖和免疫抑制功能。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌中RHOA Y42突變通過上調(diào)脂肪酸合成酶（FASN）產(chǎn)生大量脂肪酸，導(dǎo)致TME中更多的Treg和更少的腫瘤浸潤(rùn)性CD8＋T細(xì)胞。

非炎癥腫瘤的浸潤(rùn)機(jī)制

雖然炎癥腫瘤通常含有Treg，但有時(shí)在非炎癥腫瘤中也檢測(cè)到大量Treg，這表明炎癥相關(guān)浸潤(rùn)以外的機(jī)制參與了Treg向TME的募集。

研究發(fā)現(xiàn)，某些基因改變可以通過調(diào)節(jié)下游信號(hào)通路來修飾腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子。在肺腺癌中發(fā)現(xiàn)的EGFR突變通常與非炎癥性腫瘤相關(guān)，在這些腫瘤中檢測(cè)到大量的Treg，而不存在炎癥細(xì)胞。

EGFR突變通過抑制IFN調(diào)節(jié)因子1（IRF1）減少CXCL10的產(chǎn)生，這對(duì)CXCR3依賴的CD8＋T細(xì)胞向TME的募集產(chǎn)生負(fù)面影響。此外，CCL22的產(chǎn)生通過EGFR下游信號(hào)中的JUN誘導(dǎo)而增加，導(dǎo)致CCR4依賴性Treg浸潤(rùn)到TME。

在具有RHOA Y42突變的胃癌中也觀察到類似的表型，RHOA Y42突變是一種功能缺失突變，通過抑制IRF1降低CXCL10／11水平。此外，粘著斑激酶的過度激活通過調(diào)節(jié)趨化因子的產(chǎn)生與Treg浸潤(rùn)和CD8＋T細(xì)胞排斥相關(guān)。

治療相關(guān)的Treg積累

放射治療和CTLA－4阻斷抗體等治療可能促進(jìn)腫瘤中Treg的積累，這被認(rèn)為是一種適應(yīng)性免疫抵抗機(jī)制。由于對(duì)輻射的敏感性低于其他淋巴細(xì)胞，因此即使在放射治療后，Treg仍在TME中持續(xù)存在，可能導(dǎo)致某些類型癌癥發(fā)生免疫抑制性TME。在臨床前模型中，去除Treg可提高腫瘤對(duì)輻射的敏感性并抑制轉(zhuǎn)移。

在小鼠模型中，抗CTLA－4抗體通過抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）有效地去除Treg，而在患者中的作用機(jī)制仍存在爭(zhēng)議。免疫組化分析顯示，根據(jù)治療前和治療后活檢樣本的比較，抗CTLA－4抗體治療后，Treg數(shù)量增加。因此，某些治療干預(yù)可能會(huì)增強(qiáng)Treg浸潤(rùn)，從而影響后續(xù)治療的療效。

Treg作用的新機(jī)制

新的代謝機(jī)制

Tregs活化的核心是支持其生存和功能的脂質(zhì)代謝的變化，這可由脂肪酸結(jié)合蛋白（FABPs）促進(jìn)。此外，糖酵解和氧化代謝都有助于Tregs的擴(kuò)增，因?yàn)槟[瘤內(nèi)Tregs在葡萄糖攝取方面的相對(duì)優(yōu)勢(shì)可能促進(jìn)FA合成。

Tregs表現(xiàn)出另外一種獨(dú)特的代謝特征是線粒體代謝的增加。線粒體轉(zhuǎn)錄因子A（Tfam）和線粒體復(fù)合體III是維持Tregs免疫抑制功能調(diào)節(jié)基因表達(dá)所必需的。此外，F(xiàn)oxp3缺乏會(huì)導(dǎo)致mTORC2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的失調(diào)，并增強(qiáng)有氧糖酵解和氧化磷酸化。

值得注意的是，CD36在腫瘤內(nèi)的Tregs中被選擇性上調(diào)，作為一種中樞代謝調(diào)節(jié)劑。CD36通過PPARβ信號(hào)精細(xì)調(diào)節(jié)線粒體適應(yīng)性，重編程Tregs以適應(yīng)富含乳酸的TME。在抗PD－1治療過程中，CD36靶向誘導(dǎo)了額外的抗腫瘤反應(yīng)。

肝激酶B1（LKB1）調(diào)節(jié)Tregs的代謝和功能適應(yīng)度，并作為DCs免疫原性的關(guān)鍵抑制劑發(fā)揮作用。在Tregs中，LKB1的特異性缺失可導(dǎo)致一種以Th2型顯性反應(yīng)過多為特征的致命性炎癥性疾病，不僅破壞Tregs的生存、線粒體適應(yīng)度和代謝，還可誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)分子的異常表達(dá)，包括PD－1和TNF受體超家族蛋白的GITR和OX40。

新的遺傳機(jī)制

Helios可以增強(qiáng)人類胎兒CD4＋幼稚T細(xì)胞向Tregs的優(yōu)先分化，作為在炎癥反應(yīng)期間穩(wěn)定Tregs的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。腫瘤中Helios缺陷的Tregs獲得效應(yīng)T細(xì)胞功能，并通過上調(diào)對(duì)自身抗原具有高度親和力的效應(yīng)細(xì)胞因子來促進(jìn)對(duì)癌癥的免疫反應(yīng)，如GITR／PD－1表達(dá)增加和對(duì)自身抗原的反應(yīng)性增強(qiáng)。

Foxp1是一種forkhead轉(zhuǎn)錄因子，F(xiàn)oxp1的缺失會(huì)導(dǎo)致Tregs的功能受損，TSDR、CNS2、CNS3均為Foxp3相關(guān)的作用元件，調(diào)控著Foxp3的表達(dá)和功能。

YAP是Hippo通路的輔活化因子，在Tregs中高度表達(dá)，并促進(jìn)Foxp3的表達(dá)和功能。TAZ是一種誘導(dǎo)Hippo信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的TEAD轉(zhuǎn)錄因子的輔激活因子，它通過減少組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶Tip60介導(dǎo)的Foxp3的乙�；�而減弱Tregs的發(fā)育。

核受體Nr4a是維持Treg基因程序的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，參與Treg介導(dǎo)的TME抗腫瘤免疫抑制。促自噬蛋白AMBRA1也是T細(xì)胞的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。此外，SUMO特異性蛋白酶3（SENP3）介導(dǎo)的BACH2去SUMO化阻止BACH2的核輸出，從而抑制與CD4＋T效應(yīng)細(xì)胞分化相關(guān)的基因，并穩(wěn)定Treg特異性基因特征。

新的分子機(jī)制

在Tregs的分子機(jī)制方面也取得了一些新的進(jìn)展。Tregs具有豐富的IL－2受體（IL－2R）表達(dá)，依賴于活化T細(xì)胞產(chǎn)生的IL－2，提示Tregs對(duì)IL－2的消耗與其抑制功能有關(guān)。并且IL－2R依賴的轉(zhuǎn)錄因子STAT5的激活在Tregs的抑制功能中起著重要作用。

絲氨酸－蘇氨酸激酶Mst1被鑒定為Tregs中IL－2－STAT5活性的信號(hào)依賴性放大器，Tregs中Mst1和Mst2的高活性對(duì)于防止腫瘤抵抗和自身免疫是至關(guān)重要的。

在T細(xì)胞活化過程中，Tregs中Foxp3的磷酸化可以通過TAK1 Nemo樣激酶（NLK）信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)節(jié)。另外，Tregs激酶TAK1的特異性缺失可以減少外周淋巴器官中Tregs的數(shù)量，而E3泛素化連接酶TRAF6缺乏的Tregs在體內(nèi)功能紊亂。

ST2被認(rèn)為是IL－33的唯一受體，表達(dá)ST2的Tregs對(duì)IL－33有反應(yīng)，并且在IL－33刺激下Tregs的百分比增加，特別是Foxp3＋GATA3＋Tregs。在結(jié)直腸癌（CRC）的小鼠模型中，腫瘤浸潤(rùn)的Tregs優(yōu)先上調(diào)ST2，IL－33／ST2信號(hào)與腫瘤負(fù)荷呈正相關(guān)。

激活的Tregs表面表達(dá)糖蛋白－A為主的重復(fù)序列（GARP），它結(jié)合并激活潛伏的TGF－β。此外，整合素α4β1的激活也可增加Tregs的抑制能力。

Tregs穩(wěn)態(tài)通過Tregs內(nèi)在和外在機(jī)制與黏膜相關(guān)淋巴組織1（Malt1）功能密切相關(guān)。相比之下，CARD11－BCL10－MALT1（CBM）信號(hào)對(duì)于以Malt1蛋白酶依賴的方式介導(dǎo)Tregs的抑制功能至關(guān)重要。

Treg靶向治療策略

抗CTLA－4單克隆抗體，如ipilimumab，通過Treg靶向改善TME的免疫特征。然而，在臨床研究中的詳細(xì)作用機(jī)制仍然存在爭(zhēng)議。在小鼠模型中，抗CTLA－4單克隆抗體誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)完全依賴于通過Fc介導(dǎo)的ADCC對(duì)Treg的消耗。而在人類中，Treg的消耗與伊普利單抗抗腫瘤的主要療效無關(guān)。此外，靶向腫瘤內(nèi)Tregs高表達(dá)分子的雙特異性抗體，如CTLA－4和OX－40或CTLA－4和GITR，它們可能通過有效地消耗體內(nèi)的Treg來提高抗腫瘤療效。

由于腫瘤內(nèi)Treg比其他效應(yīng)T細(xì)胞表達(dá)更高水平的CD25，CD25可能是Treg耗竭的關(guān)鍵靶點(diǎn)。一些針對(duì)CD25的治療策略已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)。例如，IL－2與白喉毒素的融合蛋白denileukin diftitox用于皮膚T細(xì)胞淋巴瘤。denileukin diftitox可與表達(dá)CD25的細(xì)胞結(jié)合，并通過白喉毒素的細(xì)胞毒性作用殺死它們。

新的抗CD25抗體RG6292被開發(fā)用于選擇性地清除Tregs，而不會(huì)干擾效應(yīng)T細(xì)胞中的IL－2信號(hào)，目前正在進(jìn)行臨床評(píng)估（NCT04158583）。靶向CD25的近紅外光免疫治療（NIR）也可能是腫瘤局部Treg去除的一種有希望的方法。此外，還開發(fā)了ADCT－301，一種抗CD25的抗體偶聯(lián)藥物，用于靶向表達(dá)CD25的淋巴瘤。它業(yè)可作為另一種在腫瘤中去除Tregs的選擇，目前正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)（NCT03621982）。    

通過Tregs表達(dá)的外核苷酸酶CD39和CD73靶向腺苷途徑也可能是增強(qiáng)抗腫瘤免疫的一個(gè)有希望的靶點(diǎn)。阻斷外核苷酸酶活性的抗CD39和抗CD73抗體，如TTX－30、MEDI9447和BMS－986179，目前正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)（NCT03884556、NCT03742102和NCT02754141）。除了抑制腺苷的產(chǎn)生外，腺苷受體A2AR的小分子抑制劑也可防止腺苷依賴性T細(xì)胞抑制。這些抑制劑的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中（NCT02655822、NCT04089553和NCT02403193）。

此外，靶向VEGFA－VEGFR2軸可能通過減少TME中的Treg增殖和浸潤(rùn)來激活抗腫瘤反應(yīng)。已經(jīng)證明，抗VEGFR2抗體ramucirumab可以減少胃癌患者eTreg的增殖。以FOXP3為靶點(diǎn)的療法也有開發(fā)。AZD8701是FOXP3的反義寡核苷酸，在體外實(shí)驗(yàn)和人源化小鼠模型中部分降低了FOXP3及其下游轉(zhuǎn)錄分子的表達(dá)。AZD8701的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中（NCT04504669）。

抗CCR4抗體mogamulizumab可減少實(shí)體瘤患者中CCR4＋Treg的數(shù)量。在一項(xiàng)臨床試驗(yàn)中，mogamulizumab聯(lián)合抗PD－1抗體（nivolumab）治療的患者中證實(shí)了Treg的缺失，這表明該組合是癌癥免疫治療組合中一個(gè)有希望的選擇。

由Treg高度表達(dá)的免疫檢查點(diǎn)分子，如OX40、GITR和ICOS，也可能成為治療靶點(diǎn)。一些研究表明，這些受體的刺激降低了Treg的免疫抑制功能，導(dǎo)致效應(yīng)T細(xì)胞的激活。作為OX40激動(dòng)劑的抗體，如MEDI6469134（NCT02274155），GITR，如MK－4166135（NCT02132754），以及ICOS，如KY1044136（NCT03829501），目前正在開展臨床研究。

小結(jié)

在炎癥和非炎癥腫瘤中，TME中Treg浸潤(rùn)、激活和存活的多種機(jī)制都已被揭示，影響TME中Treg浸潤(rùn)、激活和存活的機(jī)制可能因患者而異。腫瘤細(xì)胞中的基因改變不僅決定免疫原性和炎癥狀態(tài)，而且也有助于調(diào)節(jié)TME中的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和生存，例如基于趨化因子的Treg浸潤(rùn)和基于代謝變化的Treg激活，這些都可以被特異性激酶抑制劑靶向。因此，TME中主要導(dǎo)致Treg浸潤(rùn)的機(jī)制需要通過基于基因改變的免疫學(xué)和代謝譜來表征，并以精準(zhǔn)免疫治療為目標(biāo)�；�于機(jī)制的Treg靶向治療有望改善目前的免疫治療。

參考文獻(xiàn)：

1．Mechanisms of regulatory T cellinfiltration in tumors： implications for innovative immune precision therapies．J Immunother Cancer． 2021； 9（7）： e002591．

2． Regulatory T cells in tumor microenvironment： new mechanisms， potential therapeutic strategies and future prospects． Mol Cancer． 2020； 19： 116．

3． Regulatory T Cells in Tumor Microenvironment and Approach for Anticancer Immunotherapy． Immune Netw． 2020 Feb； 20（1）： e4．

       原文標(biāo)題 : 腫瘤免疫微環(huán)境中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞