前言

腫瘤免疫治療的最新進(jìn)展強(qiáng)調(diào)了免疫系統(tǒng)控制腫瘤的能力，然而對(duì)目前的免疫療法有反應(yīng)的病人僅占一小部分。為了克服免疫治療的原發(fā)性和獲得性耐藥，如免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB），需要更多的方法來(lái)調(diào)動(dòng)抗腫瘤免疫。新的證據(jù)表明，靶向促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和抑制免疫細(xì)胞活性的表觀遺傳因子可以通過(guò)重塑腫瘤微環(huán)境（TME）來(lái)增強(qiáng)抗腫瘤免疫。最新研究發(fā)現(xiàn)zeste同源物2（EZH2）增強(qiáng)子在腫瘤和免疫細(xì)胞中的多效性功能， EZH2抑制作為一種極具潛力的方法可以加強(qiáng)現(xiàn)有的免疫治療，以改善某些癌癥患者的預(yù)后。

表觀遺傳與腫瘤免疫

基因表達(dá)的表觀遺傳調(diào)控可以使免疫細(xì)胞根據(jù)環(huán)境改變其表型，包括由TME提供的環(huán)境因素。最新的發(fā)現(xiàn)表明了表觀遺傳機(jī)制在腫瘤免疫中的貢獻(xiàn)，如DNA甲基化和組蛋白修飾，以調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫和自我耐受。另一方面，腫瘤也可以利用表觀遺傳修飾來(lái)破壞促進(jìn)有效抗腫瘤反應(yīng)的關(guān)鍵相互作用來(lái)抑制免疫。對(duì)抗這些免疫逃避策略的表觀遺傳療法可以激發(fā)免疫反應(yīng)，以彌補(bǔ)當(dāng)前的檢查點(diǎn)或其他免疫治療方法的不足。

EZH2是組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和polycomb抑制復(fù)合物2（PRC2）的催化亞單位。EZH2催化組蛋白H3的賴氨酸27的單甲基化、雙甲基化和三甲基化（H3K27me3），組蛋白標(biāo)記與緊密染色質(zhì)和轉(zhuǎn)錄抑制有關(guān)。EZH2在包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞類型的正常生物學(xué)中起作用。功能失調(diào)的EZH2與小鼠和人類多種癌癥類型的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并可通過(guò)抑制腫瘤內(nèi)抗原呈遞、免疫細(xì)胞遷移和增強(qiáng)CD4＋T調(diào)節(jié)細(xì)胞（Treg）抑制活性來(lái)促進(jìn)免疫逃避。這些功能使EZH2成為一個(gè)有吸引力的治療靶點(diǎn)，可以補(bǔ)充現(xiàn)有的免疫治療方法。目前已有幾種EZH2抑制劑（EZH2i）的開發(fā)，包括tazemetostat，它已被FDA批準(zhǔn)用于治療上皮樣肉瘤和濾泡性淋巴瘤。

EZH2在腫瘤免疫中的作用

EZH2在CD4＋T細(xì)胞分化和功能中的作用：CD4＋Th細(xì)胞通常通過(guò)分化成不同的譜系來(lái)協(xié)調(diào)免疫反應(yīng)的激活，這些譜系包括Th1、Th2、Th17和T濾泡輔助細(xì)胞（Tfh）細(xì)胞亞群；每一種細(xì)胞在抗腫瘤免疫中都扮演著不同的角色。Ezh2對(duì)Th1和Th2的分化具有抑制作用，EZH2依賴的基因表達(dá)調(diào)節(jié)也可能有助于抑制Th17分化，抑制EZH2可導(dǎo)致CD4＋T細(xì)胞增加效應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)。

Tfh細(xì)胞是一種特殊的CD4＋T細(xì)胞亞群，在誘導(dǎo)對(duì)病原體的保護(hù)性抗體反應(yīng)中起著中心作用，已成為TME的關(guān)鍵組成部分。小鼠和人類的Tfh分化依賴于BCL6主要轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，Ezh2作為Bcl6轉(zhuǎn)錄輔激活劑，從而促進(jìn)Tfh的分化。

EZH2對(duì)Tregs的調(diào)控：Tregs通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)維持免疫自我耐受和體內(nèi)平衡，并在抑制抗腫瘤免疫方面發(fā)揮重要作用。最近的研究表明，Ezh2是CD28共刺激受體參與后小鼠Treg細(xì)胞中誘導(dǎo)率最高的染色質(zhì)修飾劑，其表達(dá)有助于穩(wěn)定活化Tregs的功能表型。對(duì)小鼠MC38腫瘤模型以及人類結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌和乳腺癌的研究表明，腫瘤浸潤(rùn)的Tregs中有EZH2表達(dá)和相關(guān)的H3K27me3標(biāo)記。這反過(guò)來(lái)表明，靶向EZH2在腫瘤內(nèi)Tregs中的表達(dá)可能是增強(qiáng)抗腫瘤免疫的潛在有效途徑。

EZH2在CD8＋T細(xì)胞分化中的作用：有效和持久的抗腫瘤免疫的發(fā)展部分依賴于高度控制的CD8＋T細(xì)胞活化、增殖、終末分化和記憶過(guò)程。在T細(xì)胞分化過(guò)程中，原始的CD8＋效應(yīng)T細(xì)胞和CD8＋記憶T細(xì)胞（Tmem）的表觀遺傳包括從激活性的H3K4me3到抑制性的H3K27me3標(biāo)記模式的特征性變化。這表明EZH2在CD8＋Teff和Tmem分化中具有復(fù)雜的作用。EZH2對(duì)TAAs激活的CD8＋T細(xì)胞的影響需要對(duì)臨床相關(guān)的腫瘤模型進(jìn)行更深入的分析，以及對(duì)腫瘤內(nèi)分化不同階段的CD8＋T細(xì)胞進(jìn)行更精確的鑒定。

EZH2在NK和NKT細(xì)胞分化和功能中的作用：NK細(xì)胞是先天性的淋巴細(xì)胞，具有強(qiáng)大的細(xì)胞溶解活性，可防止微生物感染和腫瘤生長(zhǎng)。EZH2依賴的表觀遺傳學(xué)控制基因表達(dá)在NK細(xì)胞系分化和功能中起著至關(guān)重要的作用。造血干祖細(xì)胞（HSPC）中Ezh2活性的基因缺失（Vav1－Cre、EZH2fl／fl小鼠）或藥物抑制（UNC1999和EPZ005687）通過(guò)促進(jìn)小鼠NK前體細(xì)胞的存活和分化來(lái)增加NK細(xì)胞系的發(fā)育。EZH2也可能對(duì)不變自然殺傷性T細(xì)胞（iNKT）的促炎性分化產(chǎn)生負(fù)性調(diào)節(jié)；NKT細(xì)胞是一種能識(shí)別脂類抗原的先天性T細(xì)胞群，在抗腫瘤免疫中發(fā)揮了重要作用。

EZH2對(duì)TME的抑制和重塑

EZH2對(duì)淋巴細(xì)胞亞群分化和功能的貢獻(xiàn)表明，抑制EZH2有可能提高某些癌癥的抗腫瘤免疫能力。然而，關(guān)于EZH2抑制對(duì)抗腫瘤免疫的潛在影響，需要考慮EZH2和EZH2抑制對(duì)腫瘤細(xì)胞和形成TME的免疫細(xì)胞的多重效應(yīng)。

EZH2抑制促進(jìn)CD8＋Teff細(xì)胞功能并向TME轉(zhuǎn)移：CD8＋T細(xì)胞進(jìn)入TME和殺傷腫瘤細(xì)胞是腫瘤免疫的關(guān)鍵步驟，將T細(xì)胞排除在TME中是免疫逃避的關(guān)鍵策略。腫瘤浸潤(rùn)的樹突狀細(xì)胞（DC）分泌趨化因子（包括CXCL9和CXCL10）促進(jìn)T細(xì)胞募集。EZH2對(duì)這些趨化因子的抑制會(huì)損害T細(xì)胞向TME的轉(zhuǎn)運(yùn)，而對(duì)EZH2的抑制可以逆轉(zhuǎn)這種作用。

在一些癌癥中，CD8＋T細(xì)胞浸潤(rùn)增加與預(yù)后較差相關(guān)，提示免疫抑制性TME。值得注意的是，研究表明，浸潤(rùn)性T細(xì)胞可導(dǎo)致EZH2表達(dá)增加和表觀遺傳介導(dǎo)的腫瘤免疫抑制。EZH2可平衡T細(xì)胞活化，并抑制TME中CD8＋Teff介導(dǎo)的抗腫瘤免疫。

由于缺乏有效TIL是目前免疫治療的一個(gè)關(guān)鍵障礙，EZH2i的TME修飾作用可能有助于提高免疫治療無(wú)效患者的ICB療效。如上所述，EZH2在腫瘤和免疫細(xì)胞中的表達(dá)限制了CD8＋Teff向腫瘤的轉(zhuǎn)移，而T細(xì)胞激活后EZH2表達(dá)的增加也可能導(dǎo)致對(duì)ICB的先天性和獲得性抵抗。綜上所述，迄今為止的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究突出了EZH2i克服這一障礙的潛力，并擴(kuò)大了ICB在臨床上的應(yīng)用范圍。

EZH2抑制可以減輕Tregs對(duì)TME的影響：在TME中，活性增加的Treg可能會(huì)阻礙ICB的有效性，而EZH2i被認(rèn)為可能有助于克服這一障礙。在Tregs中靶向缺失Ezh2（Foxp3creEzh2fl／fl小鼠）或使用EZH2i可以通過(guò)在TME中降低Treg穩(wěn)定性來(lái)增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)。研究還表明，EZH2i可以選擇性靶向腫瘤內(nèi)的Tregs，而不會(huì)對(duì)Treg功能造成系統(tǒng)性改變，這表明其臨床應(yīng)用可能只產(chǎn)生很小的不良自身免疫反應(yīng)，盡管這一點(diǎn)尚待驗(yàn)證。

此外，與治療前的基線表達(dá)相比，在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤或轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者中使用ipilimumab治療后導(dǎo)致外周血Tregs中EZH2表達(dá)增加。而EZH2i通過(guò)降低Treg抑制活性和增加CD4＋和CD8＋Teff活性，改善了MB49和B16－F10小鼠模型中抗CTLA－4抗體治療產(chǎn)生的反應(yīng)。上述數(shù)據(jù)表明，EZH2可在活化的T細(xì)胞中誘導(dǎo)，并且在特定的環(huán)境下，有助于維持Tregs并減少對(duì)CD8＋T細(xì)胞的促炎癥反應(yīng)。抑制EZH2是一種很有吸引力的候選治療策略，可能與ICB聯(lián)合治療某些類型的腫瘤。

抑制EZH2對(duì)TME固有免疫的影響：NK細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷是在TME中誘導(dǎo)促炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一道免疫激活途徑，有證據(jù)表明，抑制EZH2可以通過(guò)改變腫瘤細(xì)胞和NK細(xì)胞來(lái)促進(jìn)這一點(diǎn)。除了EZH2在限制NK細(xì)胞成熟和活化中的作用外，EZH2抑制還可以調(diào)節(jié)NK細(xì)胞激活配體的表達(dá)。在異種移植小鼠模型中抑制EZH2導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，這在一定程度上是通過(guò)激活NK細(xì)胞介導(dǎo)的。對(duì)經(jīng)EZH2i治療的HT1376腫瘤進(jìn)行的RNA－Seq和定量PCR研究顯示，與對(duì)照組小鼠相比，包括IFNγ在內(nèi)的NK細(xì)胞激活標(biāo)志物增加。此外，免疫組化證實(shí)，與對(duì)照組相比，EZH2抑制導(dǎo)致NK細(xì)胞標(biāo)記物CD56和NCR1的表達(dá)增加。

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）可以提高腫瘤細(xì)胞的存活和增殖，促進(jìn)支持腫瘤進(jìn)展的免疫抑制微環(huán)境。研究表明，EZH2通過(guò)抑制miRNA let7－c和促炎性巨噬細(xì)胞表型的關(guān)鍵決定因子PAK1，參與維持促炎性巨噬細(xì)胞存活和極化的作用。EZH2i治療通過(guò)增加促炎性和降低抗炎性TAMs來(lái)克服HiMYC PCa轉(zhuǎn)基因前列腺癌組織移植小鼠模型中的ICB耐藥性。

盡管有證據(jù)表明EZH2可能在自身免疫模型中促進(jìn)DC功能，但關(guān)于EZH2抑制對(duì)TME中DC功能的潛在影響及其對(duì)抗腫瘤免疫的影響的數(shù)據(jù)有限。鑒于樹突狀細(xì)胞在抗腫瘤免疫中的重要性，需要進(jìn)一步深入了解EZH2抑制對(duì)腫瘤浸潤(rùn)DC和髓系細(xì)胞募集和功能的影響。

抑制EZH2可以增加TME中抗原的表達(dá)、處理和呈遞：MHC I類和II類分子的腫瘤抗原呈遞減少會(huì)損害激活的Teff細(xì)胞的識(shí)別和靶向性，這是一個(gè)關(guān)鍵的免疫逃避機(jī)制。一些研究表明，EZH2介導(dǎo)MHC I和MHCⅡ的抑制，對(duì)EZH2的抑制可以恢復(fù)某些腫瘤的免疫原性，增強(qiáng)對(duì)ICB的反應(yīng)。在另一項(xiàng)初步研究中，EZH2抑制能夠克服抗PD－1小鼠HNSCC模型MOC1－esc1中的ICB耐藥機(jī)制，與單獨(dú)使用兩種干預(yù)方法相比，EZH2i和抗PD－1抗體聯(lián)合治療可顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)。

EZH2抑制劑藥物的研究進(jìn)展

EZH2的抑制劑已成為一個(gè)活躍的研究領(lǐng)域，第一個(gè)具有抗腫瘤活性的EZH2抑制劑是3－去氮雜藍(lán)素A（DZNeP），一種最初針對(duì)埃博拉病毒開發(fā)的藥物。從機(jī)制上講，DZNeP抑制S－腺苷－L－同型半胱氨酸酶，從而降低全身H3K27me3水平。初步研究表明，DZNeP在癌細(xì)胞中誘導(dǎo)顯著的細(xì)胞凋亡，而在正常細(xì)胞中卻沒(méi)有，然而，由于DZNeP具有親水性和快速的腎臟代謝，其臨床價(jià)值很小。因此，越來(lái)越多的以EZH2為靶點(diǎn)的更有效、更具細(xì)胞滲透性的化合物已經(jīng)被開發(fā)出來(lái)并在臨床試驗(yàn)中得到評(píng)估。

Tazemetostat：迄今為止，Tazemetostat（Tazverik?）是臨床研究最廣泛的EZH2抑制劑。值得注意的是，它已于2020年1月在美國(guó)被加速批準(zhǔn)作為上皮樣肉瘤的一線治療方法。

總共有22個(gè)臨床試驗(yàn)已經(jīng)啟動(dòng)，包括兩個(gè)三期試驗(yàn)，目前正在招募患者。在第一階段的研究中，Tazemetostat表現(xiàn)出良好的安全性（NCT01897571）。不良事件一般為1級(jí)和2級(jí)，主要包括乏力（33％）、貧血（14％）、厭食（6％）、肌肉痙攣（14％）、惡心（20％）和嘔吐（9％），無(wú)死亡記錄，僅發(fā)生1例4級(jí)血小板減少癥。在本研究中，也評(píng)估了Tazemetostat的抗癌活性，結(jié)果顯示38％的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者有持久的客觀響應(yīng)，包括一些完全的響應(yīng)。然而，只有5％的實(shí)體瘤患者表現(xiàn)出持久的客觀響應(yīng)。

在II期試驗(yàn)中，Tazemetostat誘導(dǎo)15％的患者產(chǎn)生反應(yīng)，其中67％的反應(yīng)持續(xù)6個(gè)月以上。一項(xiàng)多中心、雙盲、安慰劑對(duì)照、隨機(jī)的III期研究（NCT04204941），促使Tazemetostat在上皮樣肉瘤中的應(yīng)用得到了加速批準(zhǔn)，從而使Tazemetostat成為治療這種侵襲性腫瘤的第一個(gè)分子靶向療法。

GSK2816126：GSK2816126是另一種進(jìn)入臨床試驗(yàn)的EZH2抑制劑。它最初是開發(fā)用于治療EZH2激活突變的淋巴瘤。在臨床前研究中，GSK2816126對(duì)EZH2表現(xiàn)出高選擇性（超過(guò)EZH1的100倍），此外，GSK2816126在納摩爾濃度下誘導(dǎo)體外癌細(xì)胞死亡，并在EZH2突變體DLBCL的異種移植模型中顯示出顯著的抗腫瘤活性。

目前，GSK2816126進(jìn)行了一項(xiàng)開放標(biāo)簽的劑量遞增研究，旨在評(píng)估GSK2816126在41例晚期非霍奇金淋巴瘤（20例）或難治性實(shí)體瘤（21例）中的藥效學(xué)、藥效學(xué)和臨床活性。這是一項(xiàng)由兩部分組成的研究，旨在確定GSK2816126的推薦II期劑量（RP2D）。其最嚴(yán)重的限制因素是肝轉(zhuǎn)氨酶，它將最大耐受劑量限制在2400毫克。所有患者至少有一種不良反應(yīng)，其中最常見的是約半數(shù)患者的惡心和嘔吐。此外，32％的患者出現(xiàn)嚴(yán)重的Ⅲ級(jí)或以下并發(fā)癥。在抗癌活性方面，只有一名淋巴瘤患者有部分響應(yīng)，34％的患者病情穩(wěn)定，51％的患者病情進(jìn)展。

CPI－1205：CPI－1205是一種口服、基于吲哚的小分子EZH2抑制劑，選擇性地與EZH2催化袋結(jié)合。CPI－1205的第一個(gè)臨床試驗(yàn)（NCT02395601）于2015年開始，目前已結(jié)束，結(jié)果待公布。本研究是進(jìn)行性B細(xì)胞淋巴瘤患者CPI－1205的I期序貫劑量遞增和擴(kuò)大研究。另外兩個(gè)涉及CPI－1205的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中，目前還沒(méi)有結(jié)果。一個(gè)是ProStar，這是一個(gè)Ib／II期試驗(yàn)，研究口服CPI－1205聯(lián)合恩扎魯他胺或阿比雷酮／強(qiáng)的松治療轉(zhuǎn)移性CRPC（NCT03480646）。第二項(xiàng)是一項(xiàng)I／II期試驗(yàn)，評(píng)估CPI－1205＋ipilimumab治療晚期實(shí)體瘤的療效（NCT03525795）。

其他EZH2抑制劑：除上述化合物外，還有三種化合物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，目前正在招募患者。CPI－0209是第二代EZH2抑制劑，在膀胱癌模型中顯示了抗癌活性的臨床前證據(jù)。在晚期實(shí)體瘤患者的序貫劑量遞增和擴(kuò)大研究（NCT04104776）中，將評(píng)估每日一次單獨(dú)口服或與伊立替康聯(lián)合服用。其次，PF－06821497是一種有效的口服EZH2拮抗劑，目前正處于晚期惡性腫瘤的I期檢測(cè)中（NCT03460977）。另一種口服EZH2抑制劑SHR2554也正在進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)（NCT03603951），目前正在招募復(fù)發(fā)性腫瘤患者。

還有一些研究團(tuán)體正在積極地繼續(xù)開發(fā)新的EZH2抑制劑。值得注意的是，目前正在努力通過(guò)合理的結(jié)構(gòu)活性和藥物對(duì)接方法優(yōu)化已有的化合物，以改善藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特性。此外，另一個(gè)新興的治療策略是設(shè)計(jì)小分子來(lái)破壞EZH2和EED之間的相互作用，從而導(dǎo)致PRC2失活。因此，EZH2靶向治療的快速發(fā)展和成功很可能在未來(lái)繼續(xù)下去，并將成為其他表觀遺傳藥物靶點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)。